复制性可向载体系统的应用,用于难以操纵的链球菌株

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 分子生物学分子生物学
• 合成生物学 合成生物学

背景情况:

• 像Streptomyces iranensis这样的细菌的基因操纵受到低同源重组和低效的DNA引入的阻碍.
• 以前的方法,包括自杀载体,由于合效率差,在S. iranensis中无法构建突变.

研究的目的:

• 开发和应用一种新的结合复制载体,pDS0007,用于高效的基因向难以操纵的细菌菌株.
• 为了证明载体在基因删除和新生物合成途径的发现中的实用性.

主要方法:

• 构建和应用pDS0007载体,具有自我复制和易于治愈的系统.
• 包括I-SceI识别点的强迫载体损失和同源重组.
• 使用Streptomyces编码子优化的gusA基因进行无载体克隆的视觉查.

主要成果:

• pDS0007在S. iranensis中表现出成功的外结合选择,即使结合效率差.
• 该载体促进了同源重组,使单双交叉用于基因操纵.
• 成功删除了新酸生物合成途径中的一个必不可少的基因,由31P NMR光谱学证实.

结论:

• pDS0007载体是对具有挑战性的Streptomyces物种基因向的宝贵工具.
• 这种载体系统简化了查,并实现了高效的基因改造.
• 该研究使用开发的载体成功阐明了一种新的酸盐生物合成途径.