从3D球形培养物中优化了zymogram协议,以研究瘤细胞中的MMP-2和-9活动

科学领域:

• 在瘤学瘤学.
• 生物化学 生物化学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 三维 (3D) 球体比二维单层更好地模仿瘤微环境.
• 经典的测试,如zymograms和免疫血块是挑战性,应用于3D球形培养.
• 开发用于球状体的测试对于推进瘤生物学研究至关重要.

研究的目的:

• 开发一种简单,廉价的测试方法,用于测量3D脏瘤球体中的矩阵金属蛋白酶 (MMP-2和MMP-9) 活动.
• 为了研究原I刺激对癌球体MMP活动的影响.
• 为分析AKT和MAPK/ERK等细胞内信号通路调整3D测试协议.

主要方法:

• 利用两种癌细胞系 (儿科形细胞和成人透明细胞) 来在甲基纤维素中建立3D球体.
• 用原I刺激球状体,并使用增强型紫外线测定方法测量了超级生物中的MMP-2和MMP-9活动.
• 在表皮生长因子 (EGF) 诱导后,调整了3D协议以分析MAPK/ERK通路.

主要成果:

• 在癌细胞系球状体中成功测量了亲MMP-9和MMP-2活动.
• 原I刺激降低了亲MMP-9活性,但没有影响球状体中的MMP-2活性.
• 从球体中精确测量AKT信号通路并未实现,但调整了MAPK/ERK通路分析.

结论:

• 已经建立了一个新的,简单的zymogram测定MMP-2和MMP-9活动在3D球体.
• 这种测试为研究更多生理相关的3D模型中的瘤生物学提供了有价值的工具.
• 开发的协议使得新的实验方法可以用于调查脏瘤球形体中的信号通路.