在类风湿性关节炎患者的外周血液单核细胞中独特的甲基酸多胺分布:UPLC-MS/MS方法的开发和验证

科学领域:

• 药理学 药理学是指药理学的学科.
• 分析化学 分析化学
• 免疫学 免疫学 免疫学

背景情况:

• 甲基 (MTX) 对于治疗免疫媒介性炎症性疾病至关重要.
• 细胞内MTX被新陈代谢成甲基酸多重胺酸 (MTX-PGs),这对药物保留和有效性至关重要.
• 在外周血液单核细胞 (PBMC) 中量化MTX-PGs (MTX-PG1-6) 由于低度和矩阵效应而具有挑战性.

研究的目的:

• 开发和验证一种强大的超高性能液体染色学-并联质谱法 (UPLC-MS/MS) 方法,用于在PBMC中量化单个MTX-PG1-6.
• 评估这种方法用于治疗药物监测 (TDM) 的可行性,用于用甲醇治疗的患者.

主要方法:

• 通过使用稳定同位素标记的内部标准开发了一种经过验证的UPLC-MS/MS方法.
• 经过酸脱蛋白化和固体相提取,PBMCs进行了加工.
• 使用UPLC-MS/MS进行MTX-PG1-6的量化,验证包括LLOQ,线性,恢复,矩阵效应,精度和稳定性.

主要成果:

• 该方法实现了所有MTX-PG1-6.5的低量化极限 (<1 fmol-MTX-PG1-6/百万个细胞),具有优异的线性 (R2 > 0.995).
• 验证表明可接受的恢复,转移,稳定性,没有观察到矩阵效应.
• 日内和日间精度 (%CV) 处于可接受范围内 (2.714.9%).
• 在患者样本中,MTX-PG1是最丰富的,其次是MTX-PG2到MTX-PG5;没有检测到MTX-PG6.

结论:

• 一种新的,经过验证的UPLC-MS/MS方法可以精确量化PBMC中的MTX-PG1-6.
• 这种方法支持基于PBMC的TDM研究,用于甲醇.
• 它有助于理解MTX-PG度与治疗结果或坚持之间的关系.