开发用于检测PRCoV,PRRSV和SIV的三重晶体数字PCR
Yuwen Shi1,2, Kaichuang Shi1,3, Yan Ma1
1Guangxi Key Laboratory of Animal Breeding, Disease Control and Prevention, College of Animal Science and Technology, Guangxi University, Nanning, China.
Frontiers in veterinary science
|April 15, 2025
概括
一种新的三重晶体数字PCR (cdPCR) 试验可以准确检测猪呼吸系统冠状病毒 (PRCoV),猪生殖和呼吸系统综合征病毒 (PRRSV) 和猪流感病毒 (SIV). 这种高度敏感的方法可以更好地分辨出这些常见的猪呼吸道病原体.
科学领域:
- 兽医病毒学 兽医病毒学
- 分子诊断学 分子诊断
- 动物健康 动物健康
背景情况:
- 猪呼吸系统冠状病毒 (PRCoV),猪生殖和呼吸系统综合征病毒 (PRRSV) 和猪流感病毒 (SIV) 导致严重的猪呼吸系统疾病,临床症状重叠.
- 这些病原体的准确和快速分化对于猪群中有效的疾病管理和控制至关重要.
研究的目的:
- 开发和验证一种新的三倍晶体数字PCR (cdPCR) 试验,用于同时检测和区分PRCoV,PRRSV和SIV.
- 与现有方法相比,评估开发的cdPCR试验的灵敏度,特异性和可重复性.
主要方法:
- 设计特定的原料和TaqMan探针,针对PRCoV (S基因),PRRSV (N基因) 和SIV (M基因) 的保护区域.
- 测试条件的优化,包括火温度,原料/探针度和反应周期,用于三重cdPCR格式.
- 使用分析标准和1657个临床猪样本验证试验,评估诊断灵敏度和特异性.
主要成果:
- 三重cdPCR试验显示高特异性,没有对其他猪病毒的交叉反应.
- 检测极限 (LOD) 低至5.75-6.00副本/反应,显示多重RT-qPCR的敏感性增加了26倍.
- 测试内部和测试间的变化系数 (CVs) 范围为0.19%至1.84%,表明出色的可重复性.
- 对临床样本的应用显示,PRCoV的阳性率为1.15%,PRRSV为12.79%,SIV为2.05%,所有三个病毒的诊断灵敏度和特异性为100%或接近100%.
结论:
- 已建立的三重cdPCR试验是一种高度特定,敏感和可重复的分子工具,用于同时检测和区分PRCoV,PRRSV和SIV.
- 这种测试为主要猪呼吸道病原体的诊断和流行病学监测提供了宝贵的进步.
- 改进的诊断能力可以帮助猪业及时准确地制定疾病管理策略.
