使用两个水性双相提取步骤,对帕维病毒进行连续净化
Natalie M Nold1,2, Sheridan Waldack1, Grace James1
1Department of Chemical Engineering, Michigan Technological University, Houghton, Michigan, USA.
Biotechnology progress
|April 15, 2025
概括
连续水性双相系统 (ATPS) 提供了一种具有成本效益的病毒净化方法. 这项研究优化了猪病毒的连续ATPS,实现了高恢复率和DNA去除,为自动化病毒载体生产铺平了道路.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 生物工艺工程 生物工艺工程
- 分离科学 分离科学
背景情况:
- 水性双相系统 (ATPS) 提供了一种可扩展和具有成本效益的病毒净化方法.
- 传统的批量ATPS方法在连续运行和去除杂质方面面临着挑战.
- 优化持续的ATPS对于有效的病毒载体生产至关重要.
研究的目的:
- 开发和评估一个连续的水性两相系统 (ATPS) 用于猪帕维病毒 (PPV) 净化.
- 评估持续ATPS在去除蛋白质和DNA污染物的效率.
- 探索改善连续ATPS混合,沉积和杂质去除的方法.
主要方法:
- 使用聚乙烯糖醇 (PEG) 和酸盐的两步ATPS被调整为连续运行.
- 使用度测量 (880nm的吸收) 来监测混合和沉效率.
- 整合了一种通过流动的离子交换 (AEX) 过器,以加强杂质的去除.
主要成果:
- 连续ATPS始终实现低DNA标位 (<10 ng/mL),并恢复66%的传染性PPV.
- 与批处理相比,连续运行导致较高的蛋白质污染,这归因于混合/定位效率低下.
- 优化沉线材料 (PTFE) 减少了沉时间,AEX过器在不影响蛋白质去除的情况下,额外去除了87%的宿主细胞DNA.
结论:
- 连续ATPS是一种可行的方法,可以进行可扩展和具有成本效益的病毒净化.
- 监测度和优化系统组件可以提高连续ATPS的效率.
- 传感器和过器的整合可以导致病毒载体的自动化,连续的净化过程.
