适用于高通量和定量酶学的水友性/泛恐怖性滴滴阵列

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 酶工程是什么? 酶工程是什么?
• 微流体学 微流体学

背景情况:

• 工程酶是工业和医疗应用的关键催化剂.
• 高通量选对于开发具有增强功能或新功能的酶至关重要.

研究的目的:

• 为了引入一种新的高通量酶选平台,滴滴阵列微流体酶动力学 (DA-MEK).
• 为了使成本效益的表达和酶变体的定量动态表征.

主要方法:

• 在有图案的超/泛表面上使用空气中的水滴微阵列.
• 结合无细胞蛋白质合成与液滴微流体,用于酶表达和表征.
• 采用抗体模式的幻灯片进行并行固定,净化和代表征.
• 使用原基质和时间间隔成像来确定迈凯利斯-门参数.

主要成果:

• 证明了数百个微小的酶变体的可复制表达.
• 实现量化动力特征与触媒效率跨越5个数量级.
• 显示结果与传统的微型板测定一致.
• 为有益和有害突变提供准确的动力学数据.

结论:

• DA-MEK 是一种具有成本效益和试剂效率的酶选平台.
• 该平台通过快速选大型变体库来加速酶工程.
• 在不同的条件下,DA-MEK 便于进行详细的运动分析.