在使用EasyGuide CRISPR系统的糖糖上,为Escherichia coli生长提供工程适应性等位基因

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 合成生物学 合成生物学
• 基因工程是一种基因工程.

背景情况:

• 适应性实验室进化 (ALE) 对于识别工业微生物中的有益突变至关重要.
• 需要有效的遗传工具来将这些发现的突变实施到目标菌株中.
• 现有的CRISPR工具对于快速结合等位基因来说可能很麻烦.

研究的目的:

• 开发一款基于CRISPR的简化基因工具EasyGuide CRISPR,用于高效地对大肠杆菌进行等位基因工程.
• 通过引入由ALE通知的多个基因编辑来验证EasyGuide CRISPR系统.
• 为了证明ALE和CRISPR编辑对于使用糖糖增强微生物生产的实用性.

主要方法:

• 开发了一个五等离子体EasyGuide CRISPR平台,通过大肠杆菌的重组系统组装gRNA等离子体.
• 使用特定的小分子进行PCR,生成gRNA和捐赠DNA的重组盒.
• 在大肠杆菌DH5α中基于ALE衍生的等位基因进行了22个基因编辑.
• 使用酵母在体内组装捐赠者和表达盒来增强CRISPR工具包.

主要成果:

• 在大肠杆菌DH5α中成功构建了22个基因编辑,结合了ALE发现的等位基因.
• 在工程菌株中,通过等离子体集成或pcnB删除证明了体能增长 (30-35%).
• 鉴定了一种鞭毛骨操作子删除,赋予了~5%的健身优势.
• 在E2348/69 ALE中观察到hfl系统失活的选择,这表明lysogeny维持.
• 通过使用增强的CRISPR工具包,从糖糖中建立了聚基酸合成.

结论:

• EasyGuide CRISPR 系统提供了一种强大而高效的方法,用于微生物中的等位基因工程.
• 将ALE与CRISPR介导的编辑相结合,是促进微生物生产的有力策略.
• 这种方法有助于在工业应用中使用具有成本效益的碳来源,如糖糖.