一种量化方法来监测用双化酶报告器监测STING降解

科学领域:

• 免疫学 免疫学 免疫学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 干扰素基因刺激器 (STING) 对于天生的免疫力至关重要,它可以启动对DNA病原体的炎症反应.
• 激活STING会导致TBK1激酶的激活,然后通过微自体进行 lysosomal 降解.
• 功能障碍的STING溶酶体向与神经退行性和自身炎症性疾病有关.

研究的目的:

• 开发一种用于监测STING降解的定量方法.
• 了解涉及STING的溶酶体微自的机制.
• 为研究与受损STING降解相关的疾病提供一个工具.

主要方法:

• 使用了一种双露西法酶系统与火虫露西法酶 (FLuc) 和纳米露西法酶 (NLuc).
• 构建了一个编码FLuc的表达等离子体,一个P2A自切割点,以及NLuc标记的STING.
• 测量了STING刺激后随时间推移的NLuc/FLuc比,以确定STING降解动力学.

主要成果:

• NLuc/FLuc比率准确地反映了活细胞中的STING蛋白水平.
• 该方法允许实时监测STING降解动力学.
• FLuc作为蛋白质表达的有效内部控制.

结论:

• 开发的双化酶试验提供了一种定量和动态方法来监测STING降解.
• 这种技术补充了现有的方法,如西式涂抹和FACS.
• 它为研究与STING相关的细胞过程和疾病提供了有价值的工具.