缓冲器4-乙基/乙酸盐:探索原生质谱学的新替代缓冲器
Darya Hadavi1, Che Yee Ng1, Yuandi Zhao1
1Maastricht Multi Modal Molecular Imaging (M4i) Institute, Division of Imaging Mass Spectrometry (IMS), Maastricht University, Maastricht, The Netherlands.
一种新的4-乙烯基/乙酸盐 (4EM/A) 缓冲剂在原生质谱 (MS) 研究中保留了蛋白质结构和生物活性. 这种缓冲区提供了增强的结构稳定性,并使得分析具有挑战性的蛋白质,如心脏托罗宁T.
科学领域:
- 生物物理化学 生物物理化学
- 分析化学 分析化学
- 结构生物学 结构生物学
背景情况:
- 原生质谱 (MS) 需要挥发性,电喷离子化 (ESI) 兼容的缓冲器.
- 传统的缓冲剂,如酸 (AA),可以在ESI-MS过程中诱导蛋白质展开和酸化.
- 需要一个缓冲区来维持蛋白质的原始状态,并模拟生理条件.
研究的目的:
- 为了评估本地MS分析的4-乙烯基/乙酸盐 (4EM/A) 缓冲区.
- 为了比较4EM/A与酸 (AA) 蛋白质和蛋白质复合体分析.
- 评估4EM/A对蛋白质生物活性和结构完整性的影响.
主要方法:
- 将4EM/A缓冲区与AA缓冲区进行蛋白质 (5103 kDa) 和蛋白质复合物的比较.
- 分析了原生MS配置文件,碰撞截面 (CCS) 值和到达时间分布 (ATD).
- 评估了蛋白质的生物活性,并分析了具有挑战性的蛋白质,如人类心脏热素复合物 (cTn复合物).
主要成果:
- 4EM/A导致较低的蛋白质电荷状态,在纳米-ESI和MS期间保持本地折叠.
- 离子流动性在4EM/A中显示出减少的构造变化,表明增强的稳定性和紧性.
- 莱索酶在4EM/A中表现出增加的生物活性;4EM/A首次启用了心脏特罗邦尼T (cTnT) 的本地MS分析.
结论:
- 引入了4EM/A (pKa 7.72/4.76) 作为本地MS.的优越缓冲器.
- 4EM/A保持了蛋白质和蛋白质复合物的生物活性和结构完整性.
- 4EM/A是高级本地MS应用程序的一个有前途的工具.
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