通过氨基酸诱导的蛋白质A亲和色谱的pH值变化,增强治疗性抗体的产生
1Downstream Process Development (DSPD), WuXi Biologics, Shanghai, China.
Frontiers in bioengineering and biotechnology
|April 21, 2025
概括
恶劣的蛋白质A染色体化条件导致蛋白质不稳定. 这项研究引入了使用氨基酸的pH转移化策略,将化pH提高到7.2以提高抗体的稳定性和恢复.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 蛋白质化学 蛋白质化学
- 染色体学 染色体学 是一种染色学.
背景情况:
- 蛋白A色谱对于抗体净化至关重要.
- 酸性化条件可能导致蛋白质聚合,变性和功效丧失.
- 治疗性抗体通常表现出低pH的不稳定性.
研究的目的:
- 为蛋白质A染色学开发一种较温和的化策略.
- 在抗体化过程中减轻蛋白质聚合和变性.
- 提高低pH不稳定的治疗抗体的稳定性和恢复.
主要方法:
- 使用基于氨基酸的缓冲器实施了基于pH值转移的化策略.
- 优化了预化和化缓冲器的组合.
- 测试了各种氨基酸 (氨酸,甘氨酸,血清) 的pH过渡有效性.
- 使用直径为10厘米的柱子验证了可扩展性.
- 评估了随时间和温度变化的化池稳定性.
主要成果:
- 达到7.2的化池pH值,显著提高了蛋白质的稳定性.
- 带有非极性或极性无电荷侧链的氨基酸诱导了有效的pH偏移 (0.5-2.9单位).
- 50mM Bis-Tris,pH 7.2被证明是最佳的,作为稳定pH偏移的预缓冲器.
- 可扩展的方法保持了可比产量和化池稳定性在26°C下72小时.
结论:
- 改变pH值的化是一种可扩展且具有成本效益的方法.
- 这一策略改善了低pH不稳定的治疗抗体的恢复和稳定性.
- 基于氨基酸的缓冲剂在蛋白质A染色学中为传统的酸性化提供了更温和的替代方案.
