优化合成人类V_H亲和力和可溶性通过体外亲和力成熟和最小的化

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 蛋白质工程是指蛋白质的工程.

背景情况:

• 人类可变重型 (V_H) 域是有吸引力的免疫疗法,因为与驼类V_HHs.相比,其免疫性较低.
• 合成V_H库提供了可访问性,但通常会产生具有低亲和力和低溶解性的抗体.

研究的目的:

• 为了提高人类V_H域的亲和力和可溶性,这些域来自合成图书馆,用于治疗应用.
• 为了研究体外亲和力成熟和化对V_H工程的联合疗效.

主要方法:

• 对抗SARS-CoV-2尖端蛋白的合成人类V_H菌体显示库的查.
• 在体外 affinity 成熟使用酵母表面显示和补充性决定区域的位点和突变发生.
• 结构建模和下一代测序用于变体选择.
• 通过将类残留物引入框架区域2进行最小的化.

主要成果:

• 从初始查中确定了抗原特异性V_Hs,其亲和力和溶解性较低.
• 亲和力成熟产生了V_Hs,其亲和力提高了多达100倍 (K_Ds低至3nM) 和中和能力,但聚合仍然存在.
• 最小的来化 (引入两个来体残留物) 完全解决了聚合,而不影响亲和力,热稳定性或蛋白质A结合.

结论:

• 在体外 afinity 成熟和最小的 camelization 的组合可以从合成库中产生具有高 afinity,可溶性和稳定的人类 V_Hs.
• 这种方法克服了合成V_H库的局限性,使人类基于V_H的疗法能够开发出强效和可开发的人类V_H.