相关实验视频
Updated: May 10, 2025
00:09
Pooled CRISPR-Based Genetic Screens in Mammalian Cells
Published on: September 4, 2019
21.5K
一个全面的全合一的CRISPR工具箱,用于工厂的大型屏幕
Yanhao Cheng1, Gen Li1, Aileen Qi2
1Department of Plant Science and Landscape Architecture, University of Maryland, College Park, MD 20742, USA.
The Plant cell
|April 22, 2025
概括
一个新的CRISPR工具箱可以在植物中进行大规模的遗传选,包括单种植物和双种植物. 这个全面的系统为植物科学中的各种应用提供了高通量基因编辑和激活的便利.
科学领域:
- 植物分子生物学和遗传学
- 基因组工程和功能基因组学
背景情况:
- 目前的集群定期间隔的短时间Palindromic重复 (CRISPR) 相关核酶 (Cas) 技术对于植物中的大规模屏幕是有限的.
- 有效的全基因组查对于理解基因功能和开发改进的作物特征至关重要.
研究的目的:
- 开发一个全面的,全合一的CRISPR工具箱,用于植物中各种基因组工程应用.
- 建立用于大规模CRISPR选的高通量方法,包括基因激活和突变发生.
主要方法:
- 为Cas9,Cas12a,基编辑 (细胞因子和腺因基编辑器) 和CRISPR激活 (CRISPR-Act3.0) 开发了61种全集T-DNA表达载体.
- 在大米和番茄原塑体中的载体的评估.
- 导向RNA (gRNA) 池的构建,用于大米原塑中的高通量选.
- 在和Arabidopsis thaliana中的向性突变发生屏幕 (乙酸盐合成) 和基因激活屏幕 (开花的位置T) 中的应用.
主要成果:
- 在单 (大米) 和双 (西红) 植物中证明了全合一载体的广泛而可靠的适用性.
- 建立了一个高通量方法来选择高活性gRNAs.
- 通过向突变发生和通过CRISPR激活为早期开花的有力gRNAs成功识别了针对除草剂耐药性的新基因.
结论:
- 全面的CRISPR工具箱显著提升了植物大规模遗传查能力.
- 促进有效的功能损失和功能增益研究,在植物研究和作物改进中广泛应用.
