在人类血清和血中进行扩展类固醇分析,同时使用一点内部校准进行定量测定

科学领域:

• 内分泌学 在内分泌学.
• 分析化学 分析化学
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 类固醇是重要的内源化合物,由于低度和同位素干扰,在生物流体中存在复杂的分析挑战.
• 血液中类固醇的绝对量化很困难,因为无法获得用于外部校准的空白矩阵.
• 现有的方法难以对生物样本中广泛的类固醇进行全面的分析和准确的量化.

研究的目的:

• 开发和验证一种可靠的液体染色学-并联质谱法 (LC-MS/MS) 方法,用于在血清和血中扩展类固醇分析.
• 为了使四个关键的内源性类固醇的绝对量化:皮质醇,,孕激素和androstenedione.
• 建立一种能够识别和量化多达171种类固醇化合物的综合方法.

主要方法:

• 样品的制备涉及使用有机溶剂进行蛋白质沉,然后进行水友性-脂友性平衡 (HLB) 子过.
• 液体染色学 (LC) 分离利用双静止相来分离异类固醇物种.
• 质谱 (MS) 检测采用多重反应监测 (MRM) 以后列化添加增强灵敏度;一个一点内部校准策略被用于绝对量化.

主要成果:

• 该方法成功地在NIST等离子体参考材料 (SRM 1950) 中识别了69种不同的内源性类固醇,代表了该矩阵迄今为止最全面的分析.
• 使用两种经过认证的材料进行了定量性能评估,证明了对类固醇测量的令人满意的精度和准确性.
• 开发的LC-MS/MS协议有效地解决了在类固醇分析中低内源度和异化合物相关的挑战.

结论:

• 提出的LC-MS/MS策略为广泛的类固醇分析和在人体血和血清中准确的绝对量化提供了一个强大的工具.
• 这种方法显著提高了在复杂的生物矩阵中分析类固醇代谢物的能力.
• 该协议为研究人员研究类固醇相关的生物过程和疾病提供了可靠的方法.