在抗体生物处理中通过RPA-CRISPR/Cas12a进行快速和敏感的Mycoplasma检测
Dapeng Zhang1, Tianyu Gao2, Qingcheng Guo3
1State key laboratory of macromolecular drugs and large-scale preparation, School of Pharmaceutical Sciences and Food Engineering, Liaocheng University, Liaocheng, China; NMPA Key Laboratory for Quality Control of Therapeutic Monoclonal Antibodies, Shanghai, China; State key laboratory of macromolecular drugs and large-scale preparation, School of Pharmaceutical Sciences, Wenzhou Medical University, Wenzhou, China.
使用重组酶聚合酶放大 (RPA) 辅助CRISPR-Cas12a的新快速检测方法在一小时内准确识别了生物制药生产中的Mycoplasma污染. 这种过程分析技术 (PAT) 确保了生物产品的安全性和质量,如单克隆抗体.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 微生物学 微生物学
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 菌质污染是生物制品制造中的重大风险,影响安全性和有效性.
- 目前的检测方法往往复杂且耗时,需要更快,更敏感的技术.
- 监管机构要求在细胞培养和下游产品中进行严格的Mycoplasma缺失测试.
研究的目的:
- 开发和验证一种快速,灵敏和简单的过程分析技术 (PAT),用于生物制药生产中检测Mycoplasma.
- 引入一个辅助复合酶聚合酶放大 (RPA) 的CRISPR-Cas12a (RPA-CRISPR/Cas12a) 系统,以有效地监测菌.
- 通过改进污染检测,确保生物产品的安全性和质量.
主要方法:
- 开发一种新的RPA-CRISPR/Cas12a系统,利用通用RPA原始和crRNA准保存的Mycoplasma 16SrRNA序列.
- 针对双特异性识别和生物处理样本高效率的反应条件的优化.
- 对系统在细胞培养和下游加工样本中检测Mycoplasma的性能进行评估.
主要成果:
- RPA-CRISPR/Cas12a系统实现了快速而准确的Mycoplasma检测,检测极限在10和0.1副本/μL之间.
- 整个检测过程在不到一个小时内完成.
- 该方法表现出高灵敏度和特异性,减少了假阳性信号和分析时间.
结论:
- 开发的RPA-CRISPR/Cas12a系统是第一个PAT兼容的方法,用于在抗体制造中快速监测Mycoplasma.
- 这项技术为生物产品的质量和安全提供了强有力的保证.
- 该系统在现有方法上提供了显著的进步,满足了在生物制药生产中更快,更简单地检测Mycoplasma的需求.
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