在活细胞中蛋白质密度的无标签量化

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物物理学的生物物理.
• 显微镜的使用方法

背景情况:

• 细胞内含水量和蛋白质度对细胞健康至关重要.
• 细胞应激会导致脱水和蛋白质度增加,可能导致细胞亡.
• 受到蛋白质度影响的宏分子拥挤 (MC) 效应对于细胞新陈代谢和信号传递至关重要,但仍然不太了解.

研究的目的:

• 开发和验证一种用于测量活细胞中细胞内蛋白质度的方法.
• 为了能够对宏分子拥挤的生物学作用和调节进行定量研究.
• 为实施测量技术提供实验指南和工具.

主要方法:

• 使用传输强度方程 (TIE) 成像来从失焦的明亮场图像中推导折射率.
• 使用传输透染剂 (TTD) 精确的细胞体积测定.
• 开发一个ImageJ插件用于TIE图像处理,并提供用于样本准备,图像采集和校准的协议.

主要成果:

• 展示了一种基于折射率的方法,用于简单而准确地测量附着细胞中的蛋白质度.
• TIE和TTD方法被证明是相互兼容的,并且与光成像兼容.
• 这种方法可以适应在经过修改的体积测定的情况下测量亚细胞器官中的蛋白质度.

结论:

• 开发的TIE和TTD成像方法为量化细胞内蛋白质度提供了可靠的方法.
• 这种技术有助于研究大分子拥挤对细胞功能的影响.
• 提供的ImageJ插件和协议降低了研究人员研究细胞蛋白质动态的障碍.