一个没有标签的CRISPR/Cas12a-G4生物传感器与FTA卡集成,用于检测食源性病原体

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.
• 食品安全 食品安全

背景情况:

• 由于复杂的样本准备和依赖光探针,CRISPR/Cas诊断具有高特异性,但在现场使用方面存在局限性.
• 现有的方法通常需要专门的设备和昂贵的试剂,这阻碍了资源有限的环境中的可访问性.

研究的目的:

• 开发一个简化,无标签和无设备的CRISPR/Cas12a诊断平台,用于检测食品传播病原体.
• 将高效的核酸提取与可见光输出的新信号报告机制相结合.

主要方法:

• 开发了一个结合FTA卡式核酸提取与CRISPR/Cas12a的系统.
• 使用预折叠的G-四重复 (G4) - - 提奥夫拉T (ThT) 复合物作为无标签的信号报告器,利用G4-ThT结构结合进行光.
• 在加食品样本中测试了用于检测大肠杆菌O157:H7的平台.

主要成果:

• 达到了10¹的CFU/mL的检测极限 (LOD) 对大肠杆菌O157:H7.7.
• 与定量PCR (qPCR) 和基于光探针的标准CRISPR/Cas12a系统显示出100%的一致性.
• 该平台需要最小的设备,包括便携式加热和成像设备.

结论:

• 开发的无标签,无设备平台显著提高了CRISPR/Cas诊断的现场适用性.
• 这个创新的系统提供了一种成本效益高且简化的方法来检测食物传播的病原体,特别有利于资源有限的环境.
• G4-ThT报告员系统消除了对光标记探针的需求,简化了诊断过程.