建立和比较基于其净化活动的瑞和阿布林检测方法

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 毒理学 毒理学 毒理学

背景情况:

• 瑞 (RT) 和阿布林 (AT) 是具有N-糖酶活性的有毒植物蛋白,具有生物恐怖主义风险.
• 现有的检测方法对瑞的净化活性是有效的,但abrin检测仍然有限.
• 在此之前,对abrin和氨酸净化活性的最佳反应条件是未知的.

研究的目的:

• 为了建立和优化素和阿布林的净化反应条件.
• 开发一种敏感的方法,以在体外检测瑞和阿布林清洗活性.
• 为了比较瑞和阿布林的最佳检测参数.

主要方法:

• 优化反应参数,包括基质,缓冲剂,pH值,温度,时间和素和abrin的辅因子.
• 使用高性能液体染色学-并联质谱法 (HPLC-MS/MS) 进行敏感检测.
• 研究了单链DNA作为两种毒素的首选基质.

主要成果:

• 确立了瑞和阿布林的独特最佳净化条件,有利于单链DNA.
• 的最佳条件是:1毫米酸,0.5毫米DNA15A,20毫克/毫升BSA,1毫米Zn2+,pH4.0,55°C,1小时.
• 阿布林的最佳条件是:1毫米酸,0.2毫米DNA20A,10毫克/毫升BSA,1毫米Mg2+,0.5毫米EDTA,pH4.0,45°C,2小时.
• 达到的检测极限 (LOD) 为辛的0.506 ng/mL和abrin的0.168 ng/mL.
• 显著减少了总体检测时间.

结论:

• 成功优化和区分了瑞和阿布林的净化活性检测.
• 开发的HPLC-MS/MS方法提供了更高的灵敏度和更短的时间来检测这些毒素.
• 这些发现有助于改善对辛和阿布林的诊断和安全措施.