一个CRISPR Cas12a/Cpf1策略,以促进阿斯伯吉路斯尼日尔的强大的多重基因编辑

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 克里斯普尔技术加速了阿斯伯吉勒斯种类的基因组修饰.
• 使用多个导向RNA (gRNA) 的多重基因组工程在同时传递和高效准方面提出了挑战.
• 克里斯普尔-Cas12a (Cpf1) 通过其RNase活动将单个前体RNA加工成多个gRNA提供了优势.

研究的目的:

• 开发一种多功能工具箱,用于构建CRISPR-Cpf1载体,从而实现多重基因组编辑.
• 克服同时传递多个gRNA的挑战,并确保在目标位置有效地分离DNA.
• 为了促进Aspergillus物种的快速和高效的菌株工程.

主要方法:

• 集成的等离子体与gRNA多重表达盒,用于前体RNA合成.
• 利用Cpf1的RNase活性,在体内将前体加工成多功能gRNA.
• 能够为多重向提供多达十个gRNA的载体的构建.

主要成果:

• 在Aspergillus niger中证明了三种同时基因删除的强大引入.
• 在没有事先验证或选择标记的情况下,成功地将每个基因定位为多个gRNA.
• 开发了一种系统,可以同时输送多达十个gRNA.

结论:

• 建立了一个高效的CRISPR-Cpf1系统用于多重基因组编辑Aspergillus.
• 在两周内实现了多个特定的基因组修改.
• 预计细胞工厂建设工作将大幅加快.