使用MeRIP-seq/RNA-seq使用差异性重组蛋白表达的CHO细胞的m6A修饰配置文件
Wen Wang1, Hai-Tong Wang1, Yang Guo1
1School of Pharmacy, XinXiang Medical University, Xinxiang 453003, Henan, China; International Joint Laboratory of Recombinant Drug Protein Expression System, Xinxiang 453003, Henan, China; Henan Engineering Research Center for Biopharmaceutical Innovation, Xinxiang Medical University, Xinxiang 453003, Henan, China.
International journal of biological macromolecules
|April 27, 2025
概括
N6-甲基氨酸 (m6A) RNA修饰调节了中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中治疗性蛋白质的产生. 抑制特定的基因可以提高蛋白质产量,为细胞系优化提供策略.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 细胞工程 细胞工程
背景情况:
- 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞对于重组治疗性蛋白质生产至关重要.
- 提高CHO细胞中的转基因表达和生产稳定性是一个持续的挑战.
- 在重组蛋白表达中N6-甲基氨酸 (m6A) RNA修饰的作用在很大程度上是未被探索的.
研究的目的:
- 研究m6ARNA修饰在CHO细胞中重组蛋白质生产中的作用.
- 确定影响蛋白质表达水平的m6A相关的调节机制.
- 探索优化CHO细胞系以提高蛋白质产量的策略.
主要方法:
- 针对m6A特异的甲基化RNA免疫沉降测序 (MeRIP-seq) 在高产和低产重组阿达利姆巴 (ADM) CHO细胞系上进行.
- 确定了差异甲基化峰值,并与重链 (HC) /轻链 (LC) 表达相关.
- 进行了基因表达分析和关键因素的药理抑制.
主要成果:
- 在高生产和低生产的细胞系之间确定了668个不同的甲基化峰值.
- m6A甲基化模式与HC/LC表达水平正相关.
- 抑制 Gli2 或 Met 增强了 ADM 生产和抑制了目标基因表达,涉及PI3K-Akt 和 Hippo 信号通路.
结论:
- m6A RNA 修饰在调节 CHO 细胞中重组蛋白质生产方面发挥着功能性作用.
- m6A介导调节涉及Igf2bp2,Gli2和Met等因素,可能通过PI3K-Akt和Hippo信号传递.
- 对Gli2或Met的药理向提供了一种可行的策略,可以优化CHO细胞系和提高蛋白质产量.


