使用激发扫描基于高光谱成像显微镜的多重化,活细胞成像实验的设计
Naga Annamdevula1,2, Rebecca Tang-Holmes1,2, Robert LeDoux2
1Pharmacology, University of South Alabama, Mobile, AL 36688.
概括
这项研究提供了选择光标签的协议,用于基于激发扫描的高光谱成像 (HSI). 研究人员现在可以更好地用这种先进的显微镜技术在细胞内同时量化多种蛋白质和染料.
科学领域:
- 细胞和分子生物学 细胞和分子生物学
- 显微镜和成像技术技术.
- 生物光子学 生物光子学
背景情况:
- 显微镜和光探针的进步改善了细胞跟踪.
- 实时多重成像仍然是活细胞研究中的一个挑战.
- 基于激发扫描的高光谱成像 (HSI) 提供了多重成像的潜力,但缺乏标准化的协议.
研究的目的:
- 为了解决缺乏选择多个光标签的协议,以激发基于扫描的HSI.
- 概述选择光标签和优化HSI参数的考虑因素.
- 为了证明HSI在同时量化各种细胞组件方面的能力.
主要方法:
- 开发并使用了一种定制的基于激发扫描的HSI显微镜,配有可调节过器 (360-550nm).
- 转染的HEK-293细胞含有光蛋白和充满特定染料的细胞.
- 测量了单个和组合光标签的激发光谱.
主要成果:
- 成功量化了多种光体的相对丰度和空间分布,包括NucBlue,AlexaFluor染料,Cal染料和光蛋白 (GFP,Cerulean,Turquoise,Venus,tdTomato,mCherry).
- 证明了基于激发扫描的HSI用于区分和测量单个和组合标签的有效性.
- 建立了选择多重细胞成像最佳标签组合的基础.
结论:
- 基于激发扫描的HSI是一种用于多重细胞成像的强大技术.
- 标签选择的标准化协议可以增强HSI的采用和应用.
- 这项工作促进了对蛋白质动态和细胞活动的更全面的实时分析.
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