通过细胞计数增强支气管洗液中mNGS的检测灵敏度:一项实证研究

科学领域:

• 临床诊断 临床诊断 临床诊断
• 分子生物学分子生物学
• 传染病 传染病 传染病

背景情况:

• 下呼吸道感染 (LRTI) 是致病率和死亡率的主要原因.
• 甲基因组下一代测序 (mNGS) 是LRTIs的强大诊断工具,但宿主DNA污染会降低其敏感性.
• 目前的宿主DNA耗尽方法有局限性,影响微生物检测,并可能引入污染.

研究的目的:

• 开发一种预分析方法,以准确评估支气管支气管洗液 (BALF) 中的宿主DNA含量.
• 优化宿主DNA耗尽策略,以提高LRTIs中的mNGS诊断精度.

主要方法:

• 建立了基于细胞计数的方法,用于精确测量BALF样本中的细胞含量.
• 评估细胞计数染料 (AO/PI,青,DAPI) 用于BALF分析.
• 确定了mNGS工作流程中宿主耗尽的最佳细胞计数值.

主要成果:

• 在不同的BALF样本中,色色/酸 (AO/PI) 染色显示出优异的性能.
• 一个1×10^6细胞的宿主耗尽值显著改善了高宿主背景样本中的病原体检测.
• 该方法在中度和低宿主背景样本中保持了检测灵敏度.

结论:

• 细胞计数是优化BALF mNGS.选择性溶解治疗的可靠预分析工具.
• 这种方法可以提高LRTIs的诊断准确性,同时保持病原体的完整性.
• 开发的方法解决了mNGS当前宿主耗尽技术的局限性.