通过RT-LAMP-CRISPR/Cas12a平台对RHDV GI.1和GI.2的特定检测

科学领域:

• 兽医病毒学 兽医病毒学
• 分子诊断学 分子诊断
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 子出血性疾病 (RHD) 是一种严重的,由RHDV引起的传染性疾病.
• 中国的RHDV2疫情威胁着子养殖业.
• 迫切需要针对RHDV1和RHDV2的有效和特定的诊断工具.

研究的目的:

• 为RHDV1和RHDV2.2开发一个敏感,特定和便携式的检测平台.
• 用临床样本评估开发平台的诊断性能.
• 在资源有限的环境中为RHDV提供快速诊断解决方案.

主要方法:

• 通过使用反转录循环介导同热放大 (RT-LAMP) 与CRISPR/Cas12a技术相结合,建立了一个双读出便携式检测平台.
• 评估了对常见病原体的特异性,并确定了RHDV1和RHDV2.2的检测极限.
• 使用74个临床子样本验证了平台,将结果与定量实时聚合酶链反应 (qPCR) 进行了比较.

主要成果:

• RT-LAMP-CRISPR/Cas12a平台对RHDV1和RHDV2表现出极好的特异性,没有交叉反应.
• 对RHDV1和RHDV2 VP60基因的检测极限低至10副本/μl.
• 临床样本分析显示25.68%的RHDV1阳性,43.24%的RHDV2阳性和8.11%的同时感染的样本.
• 对于两种RHDV类型,与qPCR的巧合率都很高 (97.30%),新平台显示出更高的灵敏度和检测率.
• 结果在1.5小时内可视检测,使用侧流条和光.

结论:

• 开发的RT-LAMP-CRISPR/Cas12a便携式平台是一个高度敏感,特定和快速的RHDV1和RHDV2.2诊断工具.
• 它的易用性和低设备要求使其适用于农村和资源有限的地区的临床应用.
• 这项技术为全球子行业的RHDV监测和控制提供了重大进步.