开发快速同热检测方法实时光和侧流逆转录重组酶辅助放大试验用于牛冠状病毒

科学领域:

• 兽医病毒学 兽医病毒学
• 分子诊断学 分子诊断学
• 动物卫生 动物健康

背景情况:

• 牛冠状病毒 (BCoV) 由于小牛死亡率增加和生产率下降,导致牛畜产业遭受重大经济损失.
• 目前的诊断方法如RT-PCR和ELISA耗时,需要专门的实验室和技术人员,突出需要更快,更简单的替代方案.

研究的目的:

• 开发和评估用于BCoV检测的新型快速诊断协议.
• 引入实时光反转录复合酶辅助放大 (RT-RAA) 和测试带RT-RAA (RT-RAA-LFD) 作为改进的诊断工具.

主要方法:

• 开发实时RT-RAA和RT-RAA-LFD测定用于BCoV检测.
• 使用242个临床样本评估测试性能,将结果与RT-PCR和RT-qPCR进行比较.
• 评估反应时间,温度要求,特异性和灵敏度.

主要成果:

• 实时RT-RAA在39°C的20分钟内检测到BCoV;RT-RAA-LFD在35°C的17.5分钟内检测到.
• 这两种方法都表现出高特异性,没有交叉反应性,并且增强了灵敏度 (1.46 × 10¹和1.46 × 10^{2副本/μL).}
• 实时RT-RAA-LFD显示出比RT-PCR更好的检测率,实时RT-RAA与RT-qPCR相当.

结论:

• RT-RAA方法在低单一温度下提供快速,敏感和特定的BCoV检测,使室温操作成为可能.
• 这些测试比RT-PCR/RT-qPCR具有优势,包括更短的时间,便携式仪器和更少的技术要求.
• 开发的RT-RAA协议代表了全球牛肉行业BCoV监测和控制的重大进展.