开发多重重组合酶聚合酶放大反应,以检测eumycetoma最常见的致病原体
Mickey Konings1, Emmanuel Siddig1,2, Kimberly Eadie1
1Erasmus MC, Department of Medical Microbiology and Infectious Diseases, University Medical Center Rotterdam, Dr. Molewaterplein 40, Rotterdam, 3015GD, The Netherlands.
概括
开发了一种新的多重重组合酶聚合酶放大 (RPA) 试验,以检测真菌DNA并区分关键菌瘤病原体. 这种实地友好的工具可以增强流行地区的诊断,以获得更好的患者结果.
科学领域:
- 医学真菌学 医学真菌学
- 分子诊断学 分子诊断学
- 热带疾病 热带疾病
背景情况:
- 瘤是一种被忽视的热带疾病,影响皮下组织,由各种真菌或细菌病原体引起.
- 目前对eumycetoma致病剂的诊断方法往往不适合资源有限的特有地区.
- 在受影响地区,急需为瘤提供可访问和准确的诊断工具.
研究的目的:
- 开发一种可在现场部署的异热复合复合复合酶聚合酶放大 (RPA) 试验.
- 将这种测试纳入瘤特有地区的诊断工作流程.
- 为了能够快速准确地检测和区分关键的真菌菌瘤病原体.
主要方法:
- 设计了一种多重RPA试验,针对内部转录间隔器 (ITS) 区域进行真菌DNA检测.
- 开发了专门的探针,以区分马杜雷拉菌群和塞内加尔菌群.
- 通过使用71种真菌分离物和5种菌体,评估测试性能,确定单复式和多复式格式的检测极限 (LOD).
主要成果:
- ITS探测器检测到所有71个真菌分离物,平均时间为13.1分钟.
- 特定的探针准确地识别了M. mycetomatis (9.3分钟) 和F. senegalensis (7.6分钟),没有交叉反应.
- 达到0.01 ng真菌DNA的检测极限,测试成本从1.56欧元到10.03欧元不等.
结论:
- 一种现场友好的多重RPA测定成功开发用于检测真菌DNA.
- 这种测试有效地区分了M. mycetomatis和F. senegalensis.
- 这种工具为改善eumycetoma诊断和在特有地区患者管理提供了显著的潜力.
