在Komagataellaphaffii中增强蛋白质分泌的Ribo-seq引导设计
Aida Tafrishi1, Troy Alva2, Justin Chartron2
1Chemical and Environmental Engineering, University of California-Riverside, Riverside, CA, 92521, USA.
Metabolic engineering
|May 2, 2025
概括
在酵母蛋白生产中使用核糖体分析识别瓶,可以提高重组蛋白的产量. 针对ER的基因淘汰可以显著提高人血清白蛋白 (HSA) 产量.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 酵母工程 酵母工程
背景情况:
- 酵母中的重组蛋白质生产依赖于协调的细胞过程.
- 过度生产异质蛋白质可能会造成瓶,限制产量.
- 科玛格塔拉法菲 (Komagataella phaffii) 是一种广泛用于高容量重组蛋白质生产的甲基转化酵母.
研究的目的:
- 为了识别和缓解蛋白质分泌瓶在K. phaffii.中人类血清白蛋白 (HSA) 异质表达期间.
- 为加强重组蛋白质生产的菌株工程工作提供指导.
- 利用核糖体概况来精确确定蛋白质分泌中的速度限制步骤.
主要方法:
- 用核糖体分析 (Ribo-seq) 来分析蛋白质合成和识别瓶.
- 生物信息分析被用来识别具有高核糖体利用率的非必要的ER向蛋白质.
- 实施基因淘汰策略以验证已识别的瓶.
主要成果:
- 核糖体分析成功地发现了HSA分泌中的瓶.
- 敲除特定的非必需的,ER向基因与高核糖体利用增强了HSA生产.
- 三重淘汰Gal2p,Ydr134cp和Aoa65896.1导致HSA产量增加了35%.
结论:
- 使用Ribo-seq和生物信息学的数据驱动的细胞水平方法可以有效地识别改善蛋白质生产表型的基因标.
- 针对具有高核糖体利用率的非基本ER局部化蛋白质是提高异质蛋白产量的可行策略.
- 这项研究证明了成功的菌株工程,改善了K. phaffii.中的HSA生产.
