从床边到长椅:评估不同储存和提取技术对炎症性肠病患者蛋白酶活性分析的影响
Robert W Perry1, Frederic Buemi2, Xinyu Guo2
1Division of Digestive Diseases, Department of Metabolism, Digestion and Reproduction, Faculty of Medicine, Imperial College London, London, UK; Departments of Gastroenterology and Hepatology, St Mary's Hospital, Imperial College Healthcare NHS Trust, London, UK.
便蛋白酶活性是胃肠道疾病的潜在生物标志物. 标准化储存和提取方法确保稳定测量便蛋白酶 (FP) 活性,这对于IBD诊断至关重要.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 胃肠病学 胃肠病学
- 生物标志物发现发现
背景情况:
- 蛋白解酶 (蛋白酶) 在生理过程中起着至关重要的作用.
- 蛋白酶活性升高与炎症性肠病 (IBD) 和其他胃肠道疾病有关.
- 便蛋白酶活性是胃肠道疾病的有希望的非侵入性生物标志物.
研究的目的:
- 研究储存条件和提取技术对便蛋白酶 (FP) 活性的影响.
- 建立标准化方法来测量IBD患者的FP活性.
- 评估FP活动作为IBD生物标志物的临床可行性.
主要方法:
- 分析IBD患者的便样本.
- 使用特定于血清蛋白酶的光基质测量FP活性.
- 评估不同温度和时间的储存稳定性.
- 对比各种提取缓冲器,pH值和机械破坏方法 (珠子敲击).
主要成果:
- 在4°C和室温下,FP活动在72小时内保持稳定.
- 与原始样品相比,当样品储存在提取缓冲器中时,活动下降的速度更快.
- 最佳提取发生在pH7.5-8.8的基于Tris的缓冲器中.
- 珠子敲打并没有显著影响FP活动.
- 在冰上处理样本可以最大限度地减少活动损失.
结论:
- 便样本储存和提取的标准化协议对于可靠的FP活动测量至关重要.
- 优化的方法提高了FP活动评估的稳定性和准确性.
- 便中的蛋白酶活性显示出作为IBD管理的可行的生物标志物的潜力.
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