[通过CRISPR/Cas9进行Smad3淘汰的小鼠Podocyte克隆-5细胞系的构建]
Xiu Yang1, Jiangshan Shi1, Honglian Wang2
1College of Integration of Traditional Chinese and Western Medicine to Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan, China.
概括
研究人员使用CRISPR/Cas9.9创建了Smad3淘汰赛小鼠足细胞细胞. 这些细胞抵抗TGF-β1诱导的脱差,突出Smad3的特征.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 足细胞损伤和脱差是病的关键.
- Smad3参与纤维化过程和上皮层-介质细胞过渡.
- 需要一种特定的细胞模型来研究Smad3在细胞中的作用.
研究的目的:
- 为了建立一个小鼠 podocyte 细胞系与 Smad3 淘汰.
- 研究Smad3在转化生长因子β1 (TGF-β1) 诱导的细胞脱差中的作用.
- 为研究小鼠细胞中的Smad3功能提供细胞工具.
主要方法:
- 使用CRISPR/Cas9基因编辑来准MPC5细胞中的Smad3.
- 流细胞计和单细胞分类用于克隆选择.
- 通过PCR,测序,Western blotting,RT-PCR和免疫光分析了基因淘汰和细胞反应.
主要成果:
- 成功生成了MPC5细胞系,具有双Smad3框架转移突变,并通过西方抹杀确认了淘汰.
- 在野生型MPC5细胞中TGF-β1诱导的纤维化基因表达和脱差标记.
- 斯马德3淘汰赛MPC5细胞显示显著抑制TGF-β1诱导的上皮-介质细胞过渡标志物.
结论:
- 使用CRISPR/Cas9.5确立的功能性Smad3淘汰MPC5细胞系使用CRISPR/Cas9.
- 在TGF-β1诱导的细胞脱差和上皮-介质细胞过渡中,Smad3起着关键作用.
- 这些淘汰细胞系作为一个有价值的模型来研究Smad3在podocyte生物学.
