基于ELISA的诊断系统的设计,用于检测肠道出血性大肠杆菌

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 大肠杆菌O157:H7是一种重要的人类和动物肠道病原体,引起严重的胃肠道疾病,尿路感染和溶血性尿素综合征.
• 细菌与宿主细胞的结合对于大肠杆菌O157:H7的致病性至关重要, EspA,Intimin和Tir蛋白 (EIT) 在这种结合过程中发挥关键作用.
• 这些EIT抗原是开发诊断工具检测致病性大肠杆菌O157:H7.7.的有希望的目标.

研究的目的:

• 为了生产大肠杆菌O157:H7.7的复合EspA,Intimin和Tir蛋白 (rEIT).
• 开发和评估基于ELISA的方法,使用rEIT检测致病性大肠杆菌O157:H7.7.

主要方法:

• 再组合的eit基因表达在E. coli BL21 (DE3) 使用IPTG,并通过西部涂抹证实.
• 纯化的rEIT蛋白被用于免疫子和小鼠,并净化了产生的抗体.
• 间接,竞争性和三明治ELISA格式使用纯化的抗体和细菌样本进行了开发和验证.

主要成果:

• 开发的ELISA方法特别检测到了大肠杆菌O157:H7.7.
• 间接,竞争性和三明治ELISA的检测极限分别确定为> 10⁴,10⁴和10³细菌.
• 测试的特异性被证实对其他细菌物种,包括Entroheamoragic大肠杆菌,肠毒性大肠杆菌,Klebsiella pneumoniae,Vibrio cholerae和Acinetobacter.

结论:

• 开发的ELISA方法为诊断大肠杆菌O157:H7感染提供了快速,准确和具有成本效益的手段.
• 这些基于重组蛋白质的ELISA测试对大肠杆菌O157:H7.7的常规诊断方法具有显著的优势.