用FRET成像数据来描述表皮单层中细胞运动性和细胞外信号调节的激酶动态的协议
Julio Cesar Sanchez-Rendon1, Lara Hundsdorfer1, Effie E Bastounis1
1Interfaculty Institute of Microbiology and Infection Medicine, University of Tübingen, 72076 Tübingen, Baden-Württemberg, Germany; Cluster of Excellence EXC 2124 Controlling Microbes to Fight Infections, University of Tübingen, 72076 Tübingen, Baden-Württemberg, Germany.
STAR protocols
|May 8, 2025
概括
这项研究详细介绍了使用FRET生物传感器在上皮细胞中成像细胞外信号调节激酶 (ERK) 活动波的协议. 它可以量化ERK振荡和波传播,以了解细胞运动性和生物力学.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物物理学的生物物理.
- 分子信号传输的方法
背景情况:
- 细胞外信号调节激酶 (ERK) 活性对于细胞过程,如伤口愈合和病原体传播至关重要.
- ERK信号影响宿主细胞运动和生物力学,影响生物功能.
- 了解ERK动态是解读这些细胞机制的关键.
研究的目的:
- 介绍ERK活动的光共振能量转移 (FRET) 成像的详细协议.
- 为了使单细胞ERK振荡和在上皮细胞核中的波传播的时空定量.
- 提供一种实时分析细胞单层内ERK动态的方法.
主要方法:
- 使用光共振能量转移 (FRET) 生物传感器可视化ERK活动.
- 聚焦成像是在单层培养的上皮细胞的细胞核.
- 开发了图像处理步骤,用于对ERK振荡和波传播进行定量分析.
主要成果:
- 在上皮细胞核中成功证明了ERK活性的FRET成像.
- 建立了一种方法来量化ERK振荡的时空动态.
- 能够在单细胞水平上分析ERK波传播.
结论:
- 提出的协议允许精确测量ERK活动波.
- 这种方法有助于研究ERK信号在细胞运动性和生物力学中的作用.
- 该协议作为在各种生物环境中研究ERK动态的基础.
