在分析抗体氧化稳定性的背景下对化剂进行比较评估

科学领域:

• 生物制药学分析分析
• 蛋白质化学 蛋白质化学
• 分析化学是一种分析化学.

背景情况:

• 抗体氧化是一种关键的翻译后修饰,影响安全性,疗效,清除和免疫性.
• 氧化氨酸和氨酸残留物很常见,需要强有力的控制策略.
• 逆相HPLC是量化抗体氧化的一种标准方法.

研究的目的:

• 调查样品氧化对抗体分析方法的影响.
• 为了评估金属合剂在样本准备过程中最小化氧化.
• 为了改善抗体氧化分析,确定乙烯基二胺三酸 (EDTA) 的替代品.

主要方法:

• 酶性消化和抗体子单位 (LC,Fc,Fd) 的二硫化物减少.
• 使用逆相HPLC测量氧化降解的量化.
• 金属合剂的选:EDTA,EGTA,DTPA,NTA,和HEDTA. 这些选方法包括:

主要成果:

• 在分析过程中样品的氧化损害了方法的性能,增加了可变性并限制了吞吐量.
• 六批单克隆抗体在48小时内显示亚单元氧化增加了5-50%.
• 在所有测试批次中,EGTA表现出对亚单元氧化最显著的稳定作用.

结论:

• 优化样品准备对于增加吞吐量和减少氧化分析变异性至关重要.
• EGTA是EDTA的更有效的替代品,可以在分析过程中最大限度地减少抗体亚单元的氧化.
• EGTA提供了一种可行的解决方案,以提高抗体氧化控制策略的可靠性.