含有CRISPR/Cas9遗传物质的脂质纳米粒子 (LNP) 的设计,用于家族性高胆固醇血症

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 基因工程是一种基因工程.
• 纳米医学是一种纳米医学.

背景情况:

• 家族性高胆固醇血症是一种遗传性疾病,源于低密度脂蛋白受体 (LDLR) 基因突变.
• 目前的治疗方法主要是治疗症状,这凸显了基因纠正策略的必要性.

研究的目的:

• 为CRISPR/Cas9组件设计一种基于脂质纳米粒子 (LNP) 的输送系统.
• 为纠正与家族性高胆固醇血症相关的LDLR基因突变.

主要方法:

• 使用超声波溶剂乳化来制备LNP,并使用DSPE-PEG2000-NH2和聚乙烯胺进行表面修饰.
• 单导向RNA (sgRNA) 和捐赠DNA (wt) 与LNP复合并转移到Hepa1-6 LDLR mt细胞中.
• 通过LDLR基因表达和蛋白质水平分析评估了CRISPR/Cas9基因编辑效率.

主要成果:

• 优化LNP的粒子大小为118.6±0.8nm,泽塔电位为+7.5mV.
• 通过克拉特林介导的内细胞分裂,LNP的输送显示出良好的生物相容性和细胞吸收.
• 与LNP遗传物质复合物的传染增加了LDLR基因表达的3.3倍和蛋白质水平的12.95 ng/mL.

结论:

• 开发的LNP传递系统对于传递CRISPR/Cas9组件是有效的.
• 这种基于LNP的系统在家族性高胆固醇血症中具有显著的基因治疗应用潜力.