使用培养的人类细胞系进行重组拓聚酶2生产
Anh T Q Cong1, Matthew J Schellenberg2
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Mayo Clinic, Rochester, MN, USA.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|May 15, 2025
概括
我们开发了一种可扩展的方法,用于生产高纯度的重组人体二氧化酶2 (TOP2) α和β蛋白. 该方法使用HEK293F细胞和光蛋白融合进行高效的净化和结构分析.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质表达方式
背景情况:
- 复合人体拓酶2 (TOP2) α和β对于结构和生化研究至关重要.
- 现有的方法可能无法为这些分析提供足够的纯度或产量.
研究的目的:
- 开发一种可扩展和有效的方法,用于生产高纯度重组人类TOP2α和β蛋白.
- 为了使TOP2酶的结构和生化研究.
主要方法:
- 使用了一种HEK293F细胞表达系统,具有暂时转染.
- 表达TOP2作为与YFP或mCherry的融合蛋白,用于表达监测和亲和力净化.
- 用于蛋白质抛光的快速蛋白质液态染色学 (FPLC).
主要成果:
- 实现了高纯度重组TOP2蛋白的毫克级产量.
- 证明了纯化重组TOP2.2的活性.
- YFP/mCherry的融合促进了快速的隔离和净化.
结论:
- 描述的方法提供了一个可扩展和强大的方法,用于生产活跃的,高纯度的重组人类TOP2.
- 这有助于对TOP2酶进行进一步的结构和生化研究.


