定义人类尿液细胞外囊泡的生物变异性,分析精度和定量生物生理化学特征

科学领域:

• 生物标志物发现发现
• 分析化学 分析化学
• 纳米技术纳米技术

背景情况:

• 尿液细胞外囊泡 (UEV) 是有前途的生物标志物,但它们的制备和测量中的分析错误可能会掩盖生物变异.
• 相对于生物变异 (CV_I,CV_G) 的组合分析误差 (CV_A) 的量化对于可靠的UEV分析至关重要.

研究的目的:

• 调查UEV准备和测量技术中的分析错误的大小.
• 为了比较不同的uEV隔离方法 (差速离心 [DC],碳化,聚乙烯糖醇) 与纳米粒子追踪分析 (NTA) 结合的精度.
• 为了确定个性化与基于人口的参考间隔 (RI) 适合于uEV测量.

主要方法:

• 用人类尿液的技术复制品来评估UEV度和尺寸测量的可重复性.
• 纳米粒子跟踪分析 (NTA) 用于隔离后的UEV大小和计数.
• 动态光散射 (DLS),免疫阻塞和多光子 (SLAM) 显微镜被用于进一步描述DC隔离的UEVs.

主要成果:

• 差速离心法 (DC) 在测试的隔离方法中显示出最高的精度.
• 程序错误显著影响了UEV计数和蛋白质定量,而仪器错误则主导了UEV大小变化.
• 对于UEV计数的个人内变异性 (CV_I) 低于个人间变异性 (CV_G) (IOI <0.6),有利于个性化参考间隔.
• 基于人群的参考间隔更适合用于光学氧化还原比 (ORR) 测量 (IOI > 1.4).
• DC-NTA和DC-SLAM的分析性能满足了最佳标准 (CV_A<0.5 × CV_I).

结论:

• 电直流方法为UEV隔离和表征提供了高精度.
• DC-NTA和DC-SLAM技术的分析性能适用于临床实验室环境.
• 对于UEV计数,建议采用个性化的参考间隔,而基于人口的间隔则适用于ORR.