在细胞外膀标记过程中非特异性颗粒形成,用脂性膜染料PKH2626进行标记

科学领域:

• 细胞外囊泡 (EV) 研究研究
• 生物技术是生物技术.
• 光标签技术 光标签技术

背景情况:

• 目前对细胞外囊泡 (EVs) 的光标签产生了可变的结果,阻碍了研究可重现性.
• 脂友膜染料,如PKH26,通常形成非特异性颗粒,混EV检测和分析.
• 对于EV光标签的验证,可重复的方法非常需要.

研究的目的:

• 优化使用PKH26进行EV光标签的条件,最大限度地减少非特异性染料颗粒的形成.
• 为了验证EV生物分布的体外和体外模型中精细的标签方法.
• 调查缓冲条件对PKH26非特异性颗粒形成和EV标签效率的影响.

主要方法:

• 使用超过和尺寸排除染色学优化了EV隔离.
• 在四种不同的缓冲条件下使用单EV光谱流细胞计和传输电子显微镜研究PKH26非特异性颗粒形成.
• 在基于细胞的测定和体内小鼠模型中使用流动细胞计,免疫光学和体内成像验证了优化的方法.

主要成果:

• 优化缓冲条件,没有额外的蛋白质,显著减少非特异性PKH26染料聚合物.
• 在体外和体外都实现了高效的EV标签,并大大改善了信号噪声比.
• 证明,车辆控制不足可能导致电动汽车研究中的重大错误阳性数据.

结论:

• 优化的缓冲条件为EV的PKH26标签提供了一种可重现和验证的方法,减少了工件.
• 这种改进的标签策略对于在生理和病理背景下准确评估电动汽车贩运至关重要.
• 适当的EV标签技术的基准测试和控制的包含对于可靠的实验结果至关重要.