一个实用的协议,用于相关的共聚焦光和传输电子显微镜表征细胞外囊泡
Juan M Martínez-Andrade1, Daniel Salgado-Bautista1, Kendra Ramirez-Acosta2
1Department of Microbiology, Centro de Investigación Científica y Educación Superior de Ensenada (CICESE), Ensenada, Baja California, Mexico.
Microbiology spectrum
|May 22, 2025
概括
这项研究引入了一种快速相关光和电子显微镜 (CLEM) 方法,用于成像真菌细胞外囊泡 (EVs). 该技术验证了EV的存在,并且可用于没有先进设备的实验室,适用于各种纳米粒子.
科学领域:
- 菌生物学的真菌生物学
- 显微镜技术的使用方法
- 纳米颗粒的特征表征
背景情况:
- 由于传统显微镜的分辨率限制,对纳米外细胞囊泡 (EVs) 的成像具有挑战性.
- 像传输电子显微镜 (TEM) 这样的高分辨率技术是耗时的,容易出现工件.
- 需要可访问的,快速的方法来确认EVs的囊泡性质.
研究的目的:
- 开发和验证一种快速相关光电子显微镜 (CLEM) 方法,用于成像真菌EVs.
- 证明CLEM在确认电动汽车的存在和结构方面的实用性.
- 为纳米生物结构提供一个具有成本效益和多功能的成像协议.
主要方法:
- 从 *Neurospora crassa* 培养过物中分离出细胞外囊泡 (EV).
- 用FM1-43光染料涂抹EV膜;光微球作为信托标记.
- 样品经历了连续的激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM) 和传输电子显微镜 (TEM),用OsO4或乙酸染色.
主要成果:
- 相对分析证实,LSCM检测到的光信号与通过TEM观察到的膜状囊泡状结构相对应.
- 该CLEM方法成功验证了孤立的EVs的囊泡性质.
- 该方法在成像纳米结构方面被证明是可靠的,它将光与超结构形态相关联.
结论:
- 相对光电子显微镜 (CLEM) 是一种经过验证,快速和可访问的方法,用于成像真菌EVs.
- 该协议可以在标准实验室中实现,克服专用设备的局限性.
- 该方法非常通用,适用于其他纳米实体,如病毒粒子和合成纳米粒子.
