基于差异蛋白沉的GalNAc-siRNA样本准备与LC/MS方法开发工作流程在等离体中
Youngjae Kim1, Ting Ting Zhang1, Hiroshi Sugimoto1
1Department of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, and Modeling, Takeda Development Center Americas, Incorporation, 35 Landsdowne Street, Cambridge, Massachusetts 02139, United States.
Analytical chemistry
|May 26, 2025
概括
一种新的差分蛋白沉方法增强了向肝脏的N-乙甲胺 (GalNAc) -siRNA结合物的提取,以使用液态染色体质谱法 (LC/MS) 进行准确的量化. 这种具有成本效益的方法提高了siRNA生物分析的灵敏度.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 生物化学 生物化学
- 药理学 药理学是指药理学的学科.
背景情况:
- 使用液体染色体质谱法 (LC/MS) 量化小干扰RNAs (siRNAs) 对治疗发展至关重要.
- 目前的提取方法,如固相提取 (SPE) 和混合化为N-乙基甲胺 (GalNAc) -siRNA结合物,在回收,成本和适用性方面存在挑战.
- 从等离子体等复杂的生物基质中有效地恢复GalNAc-siRNA,对于准确的生物分析至关重要.
研究的目的:
- 开发一种新,高效,具有成本效益的提取方法,用于针对肝脏的GalNAc-siRNA结合物的LC/MS生物分析.
- 克服现有的SPE和杂交方法用于siRNA提取的局限性.
- 为了实现生物样本中特定的GalNAc-siRNA及其代谢物高度敏感的量化.
主要方法:
- 开发了一种差异蛋白沉方法,利用优化的有机溶剂混合物选择性地去除血蛋白.
- 为强烈的MS/MS转换优化了工作流程,并对高分辨率的轨道飞行器和QTRAP质谱仪的LC-MS/MS参数进行了微调.
- 使用FDA批准的四种GalNAc-siRNAs (Givosiran,Lumasiran,Inclisiran,Vutrisiran) 和Givosiran代谢物 (AS(N-1) 3') 在体内大鼠研究中的血样本中验证了该方法.
主要成果:
- 对于向的GalNAc-siRNAs和主要代谢物,在单位ng/mL范围内实现了下限量化.
- 通过分析用Givosiran,Givosiran AS(N-1) 3′和Inclisiran治疗的老鼠的血样本,成功证明了该方法的适用性.
- 这种新的提取方法被证明是直接的,坚固的,高度敏感的,并且具有成本效益.
结论:
- 开发的差分蛋白沉方法为GalNAc-siRNAs的LC/MS生物分析提供了重大进展.
- 这种方法为现有的提取技术提供了灵敏,坚固和具有成本效益的替代方案.
- 该方法易于适应各种GalNAc-siRNAs的生物分析,并适用于晚期样本分析.
