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Updated: Sep 19, 2025
08:38
Scalable Transfection of Maize Mesophyll Protoplasts
Published on: June 23, 2023
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简化原生细胞转染系统用于in-vivo验证和无转基因基因组编辑在香中
Hiralben Lakhani1,2, Naveen Kumar1,2, Alka Jangra3
1Plant Tissue Culture and Genetic Engineering Lab, BRIC-National Agri-Food and Biomanufacturing Institute (BRIC-NABI) (Formerly National Agri-Food Biotechnology Institute), Department of Biotechnology, Ministry of Science and Technology (Government of India), Sector‑81, Knowledge City, S.A.S. Nagar, Mohali, Punjab, 140306, India.
Transgenic research
|June 3, 2025
概括
研究人员开发了一种高效的香原生质基因组编辑平台,用于无转基因作物. 优化的协议可以有效地隔离和转染原生质,为基因改进的香铺平道路.
科学领域:
- 植物生物技术 植物生物技术
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
背景情况:
- 克里斯普尔/卡斯基因组编辑在植物中是有效的,但对像香这样的无转基因植物繁殖作物具有挑战性.
- 开发无转基因转基因作物对于农业应用至关重要.
研究的目的:
- 建立一个高效的香原生质基因基因编辑平台,以产生无转基因作物.
- 为香品种Grand Naine优化原生质隔离和转染协议.
主要方法:
- 优化了从香叶和胚胎细胞悬浮液 (ECS) 中的原生细胞分离.
- 使用等离子体和核蛋白复合体 (RNP) 评估原生质活力和转化效率.
- 利用聚乙烯糖醇 (PEG) 介导的转染和CRISPR/Cas9与特定的gRNA向香β-胡卜素氧化酶基因.
主要成果:
- 胚胎细胞悬浮液 (ECS) 产生了最佳的原生质以进行分离.
- 通过使用PEG介导的等离子体和RNP复合物的传递,证明了高的转染效率 (30-70%).
- 确定了SpCas9与gRNA1在RNP形成中的1:2摩尔比率,达到7%的内部频率与PAM区域上游的突变.
结论:
- 成功建立了一个优化的香原质细胞转染协议.
- 该平台显示了产生无转基因,改进基因香的潜力.
- 由于实验室和实验室结果不一致,需要对指导RNA (gRNA) 功能进行进一步的体内验证.
