从人类或小鼠的呼吸道巨细胞中分离细胞外囊泡的协议,用于功能测定和体内或体外实验
Ezgi Sari1, Robert P Richter2, Delores A Stacks3
1University of Alabama at Birmingham, Graduate Biomedical Sciences, Birmingham, AL 35233, USA; Department of Pathology, University of Alabama at Birmingham Heersink School of Medicine, Birmingham, AL 35233, USA.
STAR protocols
|June 3, 2025
概括
这项研究详细介绍了一种方法,从肺洗液中分离细胞外囊泡 (EVs),并产生巨细胞衍生的EVs. 研究人员还开发了一种技术,用于测量这些EV上的矩阵金属蛋白酶 (MMP) -12活性.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 细胞外囊泡研究研究
背景情况:
- 巨细胞对于肺部的防御和受伤至关重要.
- 细胞相互作用影响肺部的炎症和组织修复.
研究的目的:
- 建立一个隔离细胞外囊泡 (EVs) 从人类支气管支气管洗液 (BALF) 的协议.
- 描述由香烟烟雾提取物 (CSE) 刺激的初级人类或小鼠膜巨细胞生成的EVs.
- 提出一种方法来量化矩阵金属蛋白酶 (MMP) -12在巨衍生的EVs上的活性.
主要方法:
- 从人类BALF中分离EVs.
- 从暴露于CSE的初级膜巨细胞生成EVs.
- 使用Förster共振能量转移 (FRET) 试验测量MMP-12活性.
主要成果:
- 开发了一个可复制的EV隔离和生成协议.
- 这项研究成功地测量了MMP-12在巨衍生的EVs上的活性.
结论:
- 提出的协议有助于研究巨细胞衍生的EVs在肺损伤和炎症.
- 这种方法允许对EV的酶活性进行表征,例如MMP-12.
