一种发光减弱的SARS-CoV-2用于识别和验证耐药突变物

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 药物发现 药物发现 药物发现
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• SARS-CoV-2 变种需要疫苗更新,但针对保存蛋白质的抗病毒药物仍然至关重要.
• 影响FDA批准的SARS-CoV-2抗病毒药物的疗效的突变正在出现.
• 识别耐药突变物对于指导有效的抗病毒疗法选择至关重要.

研究的目的:

• 开发一种安全有效的方法来识别和验证SARS-CoV-2耐药突变体.
• 为了研究对尼马特里尔维尔产生耐药性的突变,尼马特里尔维尔是SARS-CoV-2的主要蛋白酶 (Mpro) 抑制剂.
• 在耐药性研究中使用减弱的重组SARS-CoV-2 (rSARS-CoV-2 Δ3a7b-Nluc),避免功能获取 (GoF) 问题.

主要方法:

• 构建一种表达纳米化酶 (Nluc) 的减弱rSARS-CoV-2,缺乏ORF 3a和7b (Δ3a7b-Nluc).
• 通过在药物度增加的情况下通过 Δ3a7b-Nluc 来选择耐尼马特里尔维尔耐药突变.
• 识别Mpro (编码为NSP5) 中的突变,并使用逆遗传学进行验证.

主要成果:

• 成功选择了对尼尔马特雷尔维尔抗性增强的病毒群体.
• 两种非同义突变,L50F和R188G在Mpro中,被确定为赋予耐药性.
• 这两种突变,单独或组合,被证明有助于逃避涅马特里尔维尔抑制.

结论:

• rSARS-CoV-2 Δ3a7b-Nluc系统为识别和验证抗病毒药物耐药性突变提供了一个可行的和安全的平台.
• 这种方法规避了与使用野生型SARS-CoV-2进行耐药性研究相关的生物安全问题.
• 这些发现对于为开发下一代抗病毒药物和针对SARS-CoV-2的治疗策略提供信息至关重要.