通过混合LC-MS/MS来定量确定点击反应性反意义寡核酸及其在老鼠大脑中的反应性,以支持预定向PET成像

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 神经科学是一个神经科学.

背景情况:

• 对神经退行性疾病而言,反感性寡核酸 (ASO) 疗法正在出现.
• 使用点击化学的预定位正子发射断层扫描 (PET) 成像是一种评估ASO大脑生物分布的新方法.
• 量化反应性ASO对于验证这种成像技术至关重要.

研究的目的:

• 开发一种灵敏而准确的方法来确定点击反应性ASO在大脑中的反应性和分布.
• 克服使用LC-MS/MS.与非反应性降解剂区分完整的反应性ASO的挑战.
• 为了验证一种新的后提取分析物衍生方法.

主要方法:

• 开发了一种使用Malat1 ASO与甲基四甲 (MeTz) 修改 (Malat1 ASO-MeTz) 的后提取分析物衍生方法.
• 使用与TCO配体 (TCO-PEG4-DBCO) 的结合来区分反应和不反应的ASO.
• 建立了一种混合LC-MS/MS方法,用于同时量化大鼠大脑中的Malat1 ASO-MeTz和Malat1 ASO.

主要成果:

• 通过对结合产物的LC-MS/MS分析,成功地将完整的有反应的Malat1 ASO-MeTz与非有反应的形式区分开来.
• 开发了一种定量LC-MS/MS方法,能够测量大鼠大脑中的ASO分布,其度范围广泛 (1.00-1000 ng/mL).
• 将开发的方法应用于老鼠的预定向PET成像研究,证明了它们的实际实用性.

结论:

• 这项研究报告了首次成功开发了一种后提取分析物衍生方法,用于确定点击反应性ASO的反应形式和反应性.
• 开发的生物分析方法对于验证ASO生物分布的预定向PET成像至关重要.
• 这种方法将有助于评估其他用于预定向PET成像应用的放射性追踪器.