针对性共价欧标签的抗体导向细胞内化使得在现场激酶标记和诱导联等离子体质谱 (ICP-MS) 量化能够实现
Ziyang Fang1, Xinyue Zhao1, Ruxue Hou1
1Department of Chemistry and the MOE Key Laboratory of Spectrochemical Analysis & Instrumentation, College of Chemistry and Chemical Engineering, Xiamen University, Xiamen 361005, China.
Analytical chemistry
|June 5, 2025
概括
我们开发了一种新的基于抗体的方法,使用诱导合等离子体质谱法 (ICP-MS) 来标记和量化活细胞内的蛋白质. 这种方法改善了用于诊断和药物开发的细胞内蛋白质检测.
科学领域:
- 生物医学工程 生物医学工程
- 分析化学 分析化学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 精确检测活细胞中的蛋白质表达和活性对于疾病诊断和药物开发至关重要.
- 诱导合等离子体质谱法 (ICP-MS) 提供了敏感的蛋白质量定量,但需要有效的元素标记策略.
- 现有的小分子元素标签 (SM-ETs) 缺乏细胞向和有效的细胞内吸收,限制了它们在现场蛋白质分析中的应用.
研究的目的:
- 开发一种新的抗体导向策略,用于在活细胞内标记和定量特定的细胞内蛋白质.
- 克服当前元素标签的局限性,使蛋白质点的直接现场分析成为可能.
- 建立一个使用ICP-MS量化细胞内蛋白质的多功能平台.
主要方法:
- 构建了一个多功能抗体向的共价兰化物 (Ln) 标签 (Ab-TC-Ln),命名为LTX-VC-Ibt-DOTA-Eu.
- 包含一个细胞透的单克隆抗体 (Loncastuximab, LTX),用于细胞识别和内部化.
- 使用甲素B可切割连接器 (VC) 释放一个向的共价Ln标签 (Ibt-DOTA-Eu) 用于布鲁顿氨酸激酶 (BTK) 标签.
主要成果:
- 该LTX-TC-Ln系统证明了有效的癌细胞识别和内部化.
- 该策略使得细胞内BTK能够用Ln进行特定标记,用于ICP-MS量化.
- 在活细胞中成功量化了细胞内BTK,展示了针对抗体的方法的潜力.
结论:
- 建立了一个有前途的抗体导向细胞内化策略,用于细胞内蛋白Ln的标记和量化.
- 开发的方法克服了先前用于in situ蛋白质分析的元素标签的局限性.
- 这种方法为开发基于ICP-MS的各种细胞内蛋白质标的新量化方法提供了基础.


