净化,重新折叠和依赖于pH的稳定性评估寨卡病毒EDIII蛋白质的净化,重新折叠和稳定性评估
Manjima Das1, Vivek Kumar1, Rishav Madhukalya1
1Department of Biosciences and Bioengineering, Indian Institute of Technology, Roorkee, Uttarakhand, India.
概括
开发一个具有成本效益的寨卡病毒 (ZIKV) 疫苗至关重要. 这项研究优化了大肠杆菌产生的ZIKV ectodomain III (rEDIII) 的重新折叠,实现了潜在抗病毒疗法的功能蛋白.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 疫苗开发 疫苗开发
- 蛋白质生物化学 蛋白质生物化学
背景情况:
- 寨卡病毒 (ZIKV) 构成了日益严重的全球健康威胁,气候变化加剧了这一威胁.
- 目前的缓解依赖于载体控制,需要开发疫苗,特别是在低收入和中等收入国家.
研究的目的:
- 开发一种具有成本效益的方法,从大肠杆菌中产生功能性的寨卡病毒ectodomain III (rEDIII).
- 为了优化ZIKV rEDIII的重新折叠过程,表达为包含体 (IB).
主要方法:
- 在大肠杆菌中产生了重组ZIKV rEDIII,表达条件得到了优化.
- 开发了一个系统的协议,用于从包含体中提取和重新折叠ZIKV rEDIII.
- 循环二重化 (CD) 光谱和体外病毒抑制试验证实了蛋白质重新折叠和生物活性.
主要成果:
- 在Tris-HCl pH 8.8缓冲器中优化重新折叠成功恢复了原生ZIKV rEDIII形状.
- 重复折叠的ZIKV rEDIII通过抑制ZIKV进入宿主细胞来表现出生物活性.
- 平均50%的抑制剂量 (ID50) 确定为29μg.
结论:
- 建立了一个强大的协议,用于将细菌表达的ZIKV rEDIII重新折叠成活性形式.
- 这种方法可以适应其他以IBs表达的病毒蛋白,帮助弗拉维病毒诊断和治疗策略.
