在感染期间使用基因编码的,基于抗体的探针对植物病毒复制酶的活细胞成像

科学领域:

• 植物病毒学 植物病毒学
• 分子生物学分子生物学
• 细胞成像 细胞成像

背景情况:

• 植物正链RNA病毒复制与细胞内膜有关.
• 由于光标签的功能干扰,现有的方法难以在活植物细胞中可视化活跃的病毒复制体.

研究的目的:

• 开发一种用于标记和可视化活植物细胞中活跃病毒复制体的多功能技术.
• 克服当前成像技术的局限性,这些技术可能会影响复制酶的功能.

主要方法:

• 开发一个人类流感血质素 (HA) frankenbody (FB) 探针.
• 使用一个双组件可诱导系统,用于FB探针的短暂表达.
• 在Nicotiana benthamiana细胞中标记HA标记的PlAMV复制酶.

主要成果:

• 在FB探测器成功标记HA标记的PlAMV复制酶在活植物细胞中,而不会影响病毒复制效率.
• 观察到HA标记的PlAMV复制酶形成与内质网膜 (ER) 和plasmodesmata相关的点状结构.
• 复制酶定位在双链RNA (dsRNA) 附近,表明其与病毒复制复合体的关联.

结论:

• 开发的FB探针技术能够对功能植物病毒复制体进行实时亚细胞成像.
• 这种方法可以了解感染期间活跃病毒复制体的动态局部化.
• 这种技术为与现场活跃复制物共同定位宿主因子提供了潜力.