在哺乳动物细胞中免疫检查点蛋白质的特定位点碳水化合物硫化量化的协议

科学领域:

• 葡萄糖生物学 葡萄糖生物学
• 生物化学 生物化学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 碳水化合物硫转移酶8 (CHST8) 对于免疫检查点的激活至关重要.
• CHST8通过硫化GalNAcβ1-4GlcNAc (LacdiNAc) 进行糖蛋白修饰.
• 准确量化LacdiNAc水平对于理解CHST8功能至关重要.

研究的目的:

• 开发和提出一个可靠的协议来量化哺乳动物细胞中的LacdiNAc水平.
• 为了使研究人员能够研究CHST8在生物过程中的作用.
• 提供一种可适应的方法来分析其他葡萄糖形式.

主要方法:

• 开发了一种用莱克捕获的 luciferase 记者检测法.
• 该协议涉及为NanoLuc-fused蛋白质表达准备等离子体.
• 关键步骤包括素涂层板的制备,蛋白质表达和光酶活性检测.

主要成果:

• 开发的试验成功量化了哺乳动物细胞中的LacdiNAc水平.
• 发光信号与LacdiNAc的丰富度相关.
• 该协议可通过改变lectins来分析不同的糖形式.

结论:

• 莱克捕获 luciferase 记者测定为测量 LacdiNAc.提供了一种可靠的方法.
• 该协议有助于研究CHST8和相关的糖化途径.
• 该试验的适应性扩大了其在糖生物学研究中的实用性.