一种基于光偏振的多功能双化试验,使用异酸键基质仿真 (IsoMim)

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 酶学 是一种酶学.
• 药物发现 药物发现 药物发现

背景情况:

• 脱基酶 (DUBs) 是细胞过程的关键调节者,如蛋白质平衡和信号传递.
• DUBs是有吸引力的药物目标,但开发对其活动的测试具有挑战性.
• 测量DUB活动的现有方法通常是多步骤的,并且不容易扩展.

研究的目的:

• 开发和描述一种新的,高效的测定方法来测量二维基酶 (DUB) 活性.
• 为了创建一个基质模仿 (IsoMim),可以在高产量的重组生产.
• 建立一个用于高通量选 (HTS) DUB 抑制物的工具.

主要方法:

• 开发一种光极化试验,使用异酸键基质模拟 (IsoMim).
• 描述IsoMim试验在各种DUB之间区分活动的能力,包括USP家族成员,UCHL3和JOSD2.
• 实施竞争测试格式,以区分与不同无素变异的相互作用.
• 使用抑制剂PR-619来评估差异抑制的剂量反应研究.

主要成果:

• 该IsoMim试验成功地区分了多个DUBs (USP4,USP15,USP11,USP2,UCHL3,JOSD2) 的活性.
• 一个竞争分析格式,区分了密切相关的DUB类型 (USP15,USP4,USP11).
• 在四个DUB的低μM范围内观察到PR-619的差异性抑制.
• 该试验证明了用于高通量选 (HTS) 的适用性,在USP4抑制剂伪选中确定PR-619为"命中".

结论:

• 新的IsoMim试验为测量DUB活动提供了一种强大且可扩展的方法.
• 该测试有效地区分了DUB活动和抑制概况.
• 这种工具具有显著的潜力,可以加速DUB抑制剂的发现和表征.
• 该IsoMim试验是药物发现工作的宝贵资产,针对DUBs.