一种基于抗体尾酒的免疫 afinity-LC-MS 方法使得循环中的前胰岛素蛋白质和C-的超敏感和强大的量化成为可能

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 内分泌学 在内分泌学.

背景情况:

• 精确测量循环中的亲胰岛素蛋白质是糖尿病研究的关键.
• 以前的测定缺乏临床应用所需的特异性和灵敏性.
• 定量特定的亲胰岛素蛋白质形式的能力有限,阻碍了对β细胞功能和糖尿病进展的理解.

研究的目的:

• 开发一种基于LC-MS的高度敏感和特定的测定方法,用于量化完整的益胰岛素及其主要蛋白型 (des-31,32和des-64,65益胰岛素) 和循环中的C-.
• 首次将开发的测定方法应用于临床组中对亲胰岛素蛋白质形式进行分析,包括新发型1型糖尿病 (T1D).
• 评估该试验在区分疾病状态和提供对β细胞功能的见解方面的潜力.

主要方法:

• 使用优化的抗体尾酒来最大限度地减少偏差的定量亲和力捕获策略.
• 利斯-C消化生成每个亲胰岛素蛋白质形式的独特特征.
• 捕获纳米-LC与FAIMS/dCV-MS相结合,用于超敏感和选择性分析,并增强信号噪声比.

主要成果:

• 该试验实现了异常灵敏度,完整的亲胰岛素的血清量化极限 (LOQ) 为1.7 pg/mL,des-31.32亲胰岛素为2.3 pg/mL,des-64.65亲胰岛素为3.6 pg/mL.
• 该试验成功地将新发型T1D患者与对照组区分开来,这种区分在并行总-胰岛素ELISA中没有得到.
• 在临床组中观察到不同的亲胰岛素蛋白质的相对丰度比率,这表明了独特的表达模式.

结论:

• 这种新的LC-MS试验是第一个能够灵敏地量化主要循环中的益胰岛素蛋白质形式的试验.
• 该测试为beta细胞功能以及糖尿病的发病/进展提供了宝贵的见解.
• 开发的策略广泛适用于对其他生物标志物蛋白质的有针对性的测量.