构建一个缩短的autographa californica多核多重合体病毒基因组作为蛋白质表达向量

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 病毒学 病毒学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 百科病毒表达系统 (BEVS) 使用加州Autographa多重核聚合体病毒 (AcMNPV) 在昆虫细胞中产生外来蛋白质.
• 在AcMNPV的基因组中,有许多非必要的开放式读取框架 (ORF),为矢量优化提供了机会.
• 之前的研究表明,删除大型不必要的碎片可以提高外来蛋白质的产量,并减少矢量尺寸.

研究的目的:

• 研究删除额外非必需基因片段 (ac58-61,ac110-114,ac116-119,ac121-124) 对AcMNPV复制和外来蛋白质表达的影响.
• 进一步优化AcMNPV作为病毒载体,以提高BEVS中的蛋白质生产.
• 在体内评估改性AcMNPV载体的传染性.

主要方法:

• 对AcMNPV基因组进行基因操作,以删除特定的非必需基因集群.
• 在昆虫细胞中评估baculovirus复制效率.
• 外来蛋白质表达水平的量化.
• 在Spodoptera frugiperda幼虫中的病毒感染性的评估.

主要成果:

• 删除ac110-114和ac116-119片段显著增强了外来蛋白质的产生.
• 删除ac58-61严重损害了蛋白质表达,而ac121-124删除的影响很小.
• 两个片段的同时删除会影响蛋白质表达和/或病毒复制.
• 缩短的AcMNPV载体 (127-129 kb) 在体外和体内都保持了传染性,显示出最佳的蛋白质生产能力.

结论:

• 针对AcMNPV中特定非必需基因片段的有针对性的删除可以显著提高外来蛋白质表达效率.
• 优化的AcMNPV载体保持了基本功能,包括复制和传染性,使它们成为蛋白质生产的有价值工具.
• 对AcMNPV载体进行进一步的基因组缩小,为baculovirus表达系统提供了一个更有效的平台.