创新的核酸检测Clostridioides difficile使用PAM-非常规的一步式LAMP/CRISPR-Cas12b检测平台

科学领域:

• 分子诊断学 分子诊断
• 在CRISPR-Cas系统中.
• 传染病检测检测 传染病检测

背景情况:

• 困难菌感染 (CDI) 需要快速准确地检测毒性因子.
• 现有的CDI诊断方法缺乏最佳的速度,成本效益,可移植性,敏感性和特异性.
• 克里斯普尔-卡斯系统具有前景,但在预放大兼容性和原空间器相邻基因 (PAM) 序列选择性方面存在局限性.

研究的目的:

• 开发一种基于CRISPR的新型,单阶段的C. difficile毒素基因 (tcdA和tcdB) 检测平台.
• 通过消除规范PAM序列要求,克服现有CRISPR系统的局限性.
• 为CDI.创建一个快速,灵敏,具体和具有成本效益的诊断工具.

主要方法:

• 开发PAM非传统的一步式LAMP/CRISPR-Cas12b (POLC) 检测平台.
• 针对C. difficile的毒素编码基因tcdA和tcdB.
• 使用光强度测量或直接紫外线可视化进行结果解释.

主要成果:

• 波尔克平台实现了检测极限,范围从3到18个副本/μL.
• 检测时间缩短到大约40分钟,比qPCR快得多.
• 临床验证显示高灵敏度和特异性,tcdB测定达到96.6%的灵敏度和100%的特异性.

结论:

• 开发的POLC平台提供创新的,独立于PAM的基于CRISPR的核酸检测.
• 这些平台在简单的条件下表现出高灵敏度,特异性和快速检测.
• 这项技术在临床诊断和治疗点检测 (POCT) 中具有显著的潜力.