水友相互作用色谱HRMS与烯胺单立柱:完整的抗体糖形式特征的新方法

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 生物制药学分析

背景情况:

• 糖化对单克隆抗体 (mAb) 药理动力学和疗效至关重要.
• 完整的抗体分析对于理解糖形状的概况至关重要.
• 目前的RPLC-MS方法缺乏选择性来解决低丰度的甘油形式.

研究的目的:

• 开发和优化水友交互液态染色学与质谱法 (HILIC-MS) 方法相结合,用于完整的mAb糖分.
• 为了研究素组成对HILIC-MS.的烯胺单体性能的影响.
• 评估开发的HILIC-MS方法的糖形分离能力和灵敏度.

主要方法:

• 开发用于HILIC柱的烯胺单体.
• 优化素组成 (醇和DMSO比率) 用于单质合成.
• 应用HILIC-MS方法来分析五个基准完整的mAbs (IgG1和IgG4).

主要成果:

• 优化的HILIC-MS方法在完整的蛋白质水平上表现出高的葡萄糖形式选择性.
• 在单一和双重Fc糖化之间实现了基线分离 (例如,Trastuzumab G0F与G0F/G0F,Rs=3.62).
• 由一个甘氨基单元差异的甘氨基形式的部分分离得到实现 (例如,Trastuzumab G0F/G0F与G0F/G1F,Rs=1.06).
• 该方法能够检测出低丰度的甘油形式 (例如,单个G0F,M5/M5),其性能优于RPLC-MS.

结论:

• 基于烯胺单体的HILIC-MS是一种强大的工具,用于完整的mAb糖谱.
• 这种方法为表征IgG异质性提供了更高的选择性和灵敏性.
• 开发的方法在生物制药开发中具有重要的生物分析应用潜力.