隔离,生物化学表征和初级结构和活性位点的确定Dioscorea opposita ("Nagaimo") 寡酶B

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学
• 植物科学 植物科学

背景情况:

• 蛋白酶在生物过程中起着至关重要的作用.
• 了解植物衍生蛋白酶对于各种应用很重要.
• 相反的 Dioscorea (Nagaimo yam) 是一个有价值的食物来源,具有潜在的生物活性化合物.

研究的目的:

• 为了净化和生物化学地表征来自Nagaimo yam的蛋白酶.
• 为了确定纯化蛋白酶的分子,基质和运动性质.
• 阐明蛋白酶功能的遗传和结构基础.

主要方法:

• 使用离子交换,疏水和凝过色谱的蛋白酶净化.
• 生物化学表征包括分子量,基质特异性和运动分析.
• 使用特定蛋白酶抑制剂 (AEBSF,DCI,TLCK,NEM,HgCl2) 的抑制研究.
• cDNA测序和氨基酸序列分析.
• 位点定向突变发生,以确认活性位点残留物.

主要成果:

• 从Nagaimo yam.净化了一个同质的蛋白酶.
• 该酶表现出类似素的血清蛋白酶特征,被AEBSF,DCI和TLCK抑制,并由SH化合物调节.
• 推断的氨基酸序列确定了该酶为类酶B (OPB),在种中保留了活性位点 (S599,D684,H719).
• 观察到高序列同质性 (99.07%与D. alata,97.07%与D. rotundata) 是可以观察到的.

结论:

• 来自Nagaimo yam的纯化蛋白质酶是一种Oligopeptidase B (OPB),具有类似素的血清蛋白质酶活性.
• 该酶的活性部位残留物在物种中高度保存.
• 这项研究提供了关于蛋白酶的分子和生物化学特性的见解.